人和小鼠T细胞研究全线产品

Human

用于细胞治疗的人T细胞的生产是一个复杂、多步骤的过程。在保证所需的最终表型和功能的同时，可以对很多步骤进行优化以获得最大产量。STEMCELL Technologies提供一整套T细胞分选、激活及扩增的产品，以帮助您优化人T细胞治疗研究！

图1. 人T细胞治疗研究工作流程

T细胞治疗研究的关键技术

使用EasySep™从白细胞单采术样本或 PBMCs中分离高纯度的T细胞

图2. 通过人EasySep™ Release人CD3正选试剂盒分选的T细胞具有高 纯度 起始样本为人PBMCs，使用EasySep™ Release CD3正选试剂盒（产品号 #17751） 分选的CD3+ 细胞含量通常可达98.7 ± 0.9%（平均值 ± 标准差，使用EasySep™ 紫色磁极）

使用ImmunoCult™人T细胞激活剂激活T细胞

图3. T细胞在经过ImmunoCult™人CD3/CD28或CD3/CD28/CD2 T细胞 激活剂刺激后被活化 使用EasySep™分选的T细胞在添加了ImmunoCult™人CD3/CD28 T细胞激活剂（产 品号 #10971）或ImmunoCult™人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂（产品号 #10970）的 ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基（产品号 #10981）中从第0天开始培养。以CD4+ T细胞和CD8+ T细胞设门，并通过CD25+ 在第0天和第3天的表达评估T细胞的活化程 度。培养开始时，CD25+ 细胞含量为（A）5.63 ± 2.4%（平均值 ± 标准差）。3天后， 被ImmunoCult™人CD3/CD28 T细胞激活剂和ImmunoCult™人CD3/CD28/CD2 T细 胞激活剂活化的CD25+ 细胞含量分别为（B）75.4 ± 13.8%和（C）88.8 ± 3.2%（平 均值 ± 标准差）。

使用ArciTect™ CRISPR-Cas9系统对人T细胞进行遗传修饰

图4. 人T细胞的高效TRAC敲除

（A）用ImmunoCult™人CD3/CD28或CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂活化人T细胞2 - 3天，通过将TCRαβ和CD3受体与抗体结合后进行流式分析来测定人T细胞中TRAC的敲除效 率。每个条件的每个数据点代表一个单独的供体；n = 4 - 8个供体。误差线表示平均值 ± 标准差。（B - C）被ImmunoCult™人CD3/CD28 T细胞激活剂活化3天的T细胞的（B）模 拟电转和（C）RNP电转的TCRαβ和CD3流式分析图。（D）被ImmunoCult™人CD3/CD28 T细胞激活剂活化3天的T细胞的CD4和CD8流式分析图。

使用ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基扩增人T细胞

图5. 当使用添加了ImmunoCult™人T细胞激活剂的ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基进行培养时，T细胞表现出强劲的扩增能力 将T细胞在添加了Immunocult™人CD3/CD28 T细胞激活剂、ImmunoCult™人CD3/ CD28/CD2 T细胞激活剂或基于磁珠的竞品激活试剂的Immunocult™-XF T细胞扩 增培养基（含rhIL-2）中扩增超过14天。在第0天至第14天测定其扩增倍数。（请注 意，扩增过程中T细胞未被重新活化）。

图6. 当使用添加了ImmunoCult™人T细胞激活剂的ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基进行培养时，T细胞保持高活率 将T细胞在添加了Immunocult™人CD3/CD28 T细胞激活剂、ImmunoCult™人CD3/ CD28/CD2 T细胞激活剂或基于磁珠的竞品激活试剂的Immunocult™-XF T细胞扩 增培养基（含rhIL-2）中扩增超过14天。在第0天至第14天测定其活率。（请注意，扩 增过程中T细胞未被重新活化）。

图7. 相比于其他无血清及含血清培养基而言，ImmunoCult™-XF T细胞扩 增培养基有更强的T细胞扩增能力 T细胞被ImmunoCult™人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂活化，并培养在（A） Immunocult™-XF T细胞扩增培养基或无血清的竞品培养基（含rhIL-2，每个供体三个重 复），或（B）Immunocult™-XF T细胞扩增培养基或含血清的竞品培养基（含rhIL-2，每个 供体三个重复）中。在培养期间的第0天以及每7至8天，使用ImmunoCult™人CD3/CD28/ CD2 T细胞激活剂对T细胞进行刺激。相对于初始接种密度，在第21天分析T细胞的扩增 倍数。（A）与所有测试的无血清竞品培养基相比，ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基 显示出对总T细胞更显著的扩增能力。竞品1到6代表无血清的竞品培养基。每一列误差线 代表平均值 ± 标准差（ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基与其他所有无血清培养基 的对比中，P＜5x10-13，通过线性混合效应模型与线性回归方法进行测试，n=4 - 19个供 体）。（B）与所有测试的含血清的竞品培养基相比，ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基 显示出对总T细胞相似或更显著的扩增能力。竞品1到4代表含血清的竞品培养基。每一列 误差线代表平均值 ± 标准差（ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基与其他所有含血清 培养基的对比中，P＜0.0006，但竞品4除外，通过线性混合效应模型与线性回归方法进 行测试，n=1 - 19个供体）。

为何使用ImmunoCult™ T细胞激活和扩增试剂？

性能优化。无需使用磁珠即可强化激活效果，实现快速扩增。

配方确定。无需添加血清即可获得一致的扩增效果。

可购买。无版权限制，可用于T细胞免疫疗法的生产。

为何使用STEMCELL的试剂进行细胞治疗研究应用？

一致性。成分确定的配方最大限度地降低各批次之间的差异。

高质量。全面的质量控制检测。

文档齐备。可追溯性文件包括分析证明（CoAs）和原产地证书（CoOs），节省了准备IND提案或临床试验申请的时间。

专业的咨询服务。全球经验丰富的专业人士帮助监管流程。

从实验室到临床

我们与GE Healthcare合作，旨在将这些T细胞分选、激活和扩增的产品开发成cGMP级别的试剂，以便研究人员能更好地进行临床研究。这些产品遵循了美国药典 （USP）上对辅助材料的建议，专为细胞治疗研究应用而设计。

联系我们，根据批准的新药研发（IND）或临床试验申请（CTA）对这些试剂进行鉴定。

欲了解更多信息，请访问www.stemcell.com/t-cell-therapy。

Mouse

小鼠脾脏T细胞的扩增方案 :

（1）用PBS稀释配置anti-CD3功能性抗体并铺板，浓度为1-5 μg/ml。根据需要选择并计算所需抗体的量。以96孔板为例，每孔加入50 μl(6孔板500 μl)。37℃2 h或者4℃过夜(过夜包被效果比较好)。

（2）加入细胞前吸去孔内抗体溶液，加入200 μl (6孔板2 ml)PBS洗涤2次，去除未结合抗体。

（3）研磨小鼠脾脏，PBS洗涤细胞1次，离心后的沉淀弹散，加入2 ml红细胞裂解液(1X）(Cat#64010-00-100)，室温裂解5 min，用完全培养基洗涤细胞一次；

注：推荐使用BioGems红细胞裂解液，裂解温和，对骨髓细胞损伤小！

（4）用含有anti-CD28(1-2 ug/ml)以及IL-2(10-50 ng/ml)的完全培养基重悬细胞，加入96孔板(或6孔板内)。(96孔板加入1*105细胞，6孔板加入2-5*106细胞)

（5）培养过程中隔天换液，进行细胞计数并观察细胞状态，培养3-5天即可见到细胞明显增值。