RayBiotech 抗体芯片在肺癌及微环境信号通路研究上的应用

杂志名称: Nature Communications

文献题目：Cancer-associated fibroblasts regulate the plasticity of lung cancer stemness via paracrine signaling

本实验所用产品：RayBiotech 人AAH-CYT-4000 抗体膜芯片 （274个生长、趋化、血管、炎症等细胞因子抗体芯片）

实验样品：细胞培养上清（无血清培养基）

研究背景:

肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。对肺癌的治疗病人在最初都表现出好的反应，但多数病人会在1年内表现出药物抵抗和复发。研究表明复杂的细胞间相互作用形成了肿瘤微环境，其中包括的肿瘤干细胞被认为是引起恶性肿瘤的来源。肿瘤干细胞和微环境在肿瘤的复发、转移以及耐药性中都起到了很重要的作用。所以特异性的针对肿瘤干细胞和肿瘤微环境是近年来肿瘤的治疗的新方向。肿瘤干细胞是治疗癌症的潜在靶标，但是肿瘤干细胞CSC如何在体内保持干细胞特性和多塑性尚不清晰，本文研究肿瘤相关成纤维细胞对肺癌干细胞可塑性的重要作用和作用机理。

研究思路：

1 、细胞培养

NF ---普通成纤维细胞

CAF---肿瘤相关成纤维细胞

CLS1---肺癌干细胞

NF+ CLS1---普通成纤维细胞与肺癌干细胞共培养

CAF+ CLS1---肿瘤相关成纤维细胞与肺癌干细胞共培养

2 、细胞增殖能力、干细胞特性检测

RT-PCR，免疫荧光、克隆形成检测等。实验结果显示：CAFs 与干细胞共培养后，肺癌干细胞的生长能力 增强，干细胞相关基因 Oct3/4，Nanog 表达增高，说明 CAFs 保持了肿瘤干性和高致癌性。

3、 RayBiotech抗体芯片检测

AAH-CYT-4000芯片检测细胞上清中各种细胞因子表达水平的变化。芯片结果揭示肿瘤干细胞的生长及干性是由CAFs旁分泌IGF-II/IGFIR/Nanog信号通路来调控的。

4 、统计分析
T 检验，方差分析，非参数U检验、Spearman秩检验、K-M生存分析

结论：本论文通过肿瘤相关成纤维细胞与肿瘤干细胞共培养的方法，研究得出 CAFs通过旁分泌使得CSCs去分化且重新获得干细胞特性。且通过使用RayBiotech抗体芯片研究CAFs存在的情况下肿瘤干细胞IGF1R信号通路激活，CAFs表达IGF-II 诱导Nanog表达促进了细胞的干性。如果IGF-II/IGF1R 信号阻塞就会抑制Nanog的表达，肿瘤干细胞特点变弱。本论文证明了CAFs为肿瘤细胞提供了保持其干性的微环境。靶标该旁分泌信号传递可能会对NSCLC的治疗提升一个新的台阶。