mTeSR3D：用于hPSCs大规模悬浮培养

mTeSR3D是一款专门用于将人多能干细胞（hPSCs）进行大规模悬浮培养及扩增的培养基。mTeSR3D采用优化于悬浮培养的配方，初始仅需一个6孔培养板，无需使用微载体或基质，即可在2-3周内扩增至1 x 109个未分化hPSCs细胞。mTeSR3D试剂盒包括接种培养基和供给培养基，换液使用分批供给的方式（Fed-Batch），大大节省了时间和培养基用量。

mTeSR3D流程经过优化（图1），传代仅需3天/4天。第0天，将hPSC接种到mTeSR3D接种培养基中，并添加10 μM ROCK抑制剂Y-27632。在随后几天中，仅需简单添加mTeSR3D供给培养基，无需对培养基进行完全更换。

图1：mTeSR3D实验流程

以mTeSR3D扩增的人PSCs生长强劲（图2），且维持多能性标志物的高表达（图3）。每次传代结束时hPSC聚集体都具有一致的形态，且大小通常是均匀的（图4）。为获得最佳实验结果，每次传代结束时聚集体大小应约为350-400 μm。在mTeSR3D中培养的hPSC保留三谱系分化的能力，且对三胚层谱系均显示出很强的分化能力（图5）。

图2. mTeSR3D中hPSCs的累积生长。以分批供给的方式在mTeSR3D中扩增多个hPSC细胞系，并以细胞团块状态传代10代。所有细胞系均显示强劲的生长。生长速率取决于各细胞系。误差幅度代表95%的置信区间。

图3. 在mTeSR3D中未分化细胞标志物的维持。hPSCs在mTeSR3D中连续传代10次后仍保留未分化细胞的标志物OCT4和TRA-1-60。误差幅度代表95%的置信区间。

图4. mTeSR3D中hPSC聚集体的形态。在mTeSR3D中培养3-4天后，生成大小约为350-400μm的hPSC聚集体。

图5. 在mTeSR3D中经多次传代后的hPSCs的三谱系分化。在mTeSR3D中培养的hPSCs可高效分化为所有三个胚层。使用STEMdiff三谱系分化试剂盒（产品号#05230）评估在mTeSR3D中悬浮培养的细胞的分化潜能。以上图示为H1 hES细胞，其他测试的细胞系（包括H9、H7和WLS-1C）也显示相似结果。