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ELISA实验操作注意事项-嘉远生物
一 实验前将所有试剂平衡至室温(至少30min),包括样本、TMB(非常重要)
二 强烈建议老师在ELISA操作时样本和标准品都做复孔(请务必这样操作),如果条件有限,可以只做标准品的复孔。因为这样可以:
求平均值,确保实验结果的准确性
对试剂盒的性能进行评估
对自己的操作进行评估
解决跳孔。
严格按照说明书要求溶解标准品,室温溶解10-30min;建议老师进行标准品稀释时,在EP管中进行;
说明书中进行孵育的步骤,请一定要用微孔板振荡器震荡,这个很重要;
洗板方法:手洗、机洗都可以,如果是手洗的话,老师可以按照说明书操作,我们建议老师洗涤6次,第一次加入洗液10-15s,弃掉;第二次加入洗液,在振荡器振荡3min,然后弃掉洗液,确保每次都尽量将洗液弃干净;该两次洗涤为一个循环,重复该循环3次,即可。
显色时间或终止液添加时间:可以根据标准品颜色来确定,当最高浓度标准品颜色不再变深,倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时,可以终止反应;或者老师也可以根据加入TMB后,反应液在620nm的OD值,0.9-0.95之间可以终止。或者老师根据说明书的具体操作。