蛋白质芯片检测适用样品 & 样品收集方法

蛋白芯片原理

一、适用于蛋白质芯片的常见样品

血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液；除了这些常见的样品，全世界客户使用RayBiotech抗体芯片产品检测成功的特殊样品还有尿液、眼泪、唾液、痰、脑脊液、前列腺液、腹腔注射液、奶水、初乳、支气管肺泡灌洗液、脓肿液、中耳液、血小板释放物、骨头裂解液等。

 组织裂解液一般比较容易造成芯片的背景较高，目前有客户使用RayBiotech抗体芯片发表文献测试过的组织裂解液有肺组织、支气管、子宫内膜组织，肝脏组织，宫颈肿瘤、脾、脑组织、宫颈组织、囊肿组织等，这些组织裂解液做出芯片结果的背景一般都在可以接受的范围内，但是不能排除一些非常罕见的组织裂解液对芯片信号背景影响较大。

二、样品收集方法

1、血清

收集全血至普通离心管或者采血管（BD vacutainer公司的红头真空采血管，不含抗凝剂、防腐剂或者分离剂），4°C放置30-45min，以3000-5000rpm/min离心10min，取上清检测或者冻存（-20或-80°C）。

2、血桨

收集全血至BD vacutainer公司的EDTAK2、肝素锂、或者枸橼酸钠等真空采血管，以3000-5000rpm/min离心10min，取上清检测或者冻存（-20或-80°C）。

3、尿液

收集不添加稳定剂的尿液样本，高速离心样本（如：10000rpm离心5min或5000rpm离心10min），取上清分装，利用干冰或甲醇浴使样本迅速结冻，储存于-80°C备用。

4、细胞上清（条件培养基）

血清中含有部分细胞因子，所以最好制备无血清或低血清条件培养基。在第0天，于100mm培养皿中加入完全培养基，然后接种1ⅹ106个细胞，培养第3天，倒掉培养基，加入6-8ml低血清培养基（如含有0.2%牛血清的培养基）；第5天，收集低血清的培养基于15ml离心管中，2000rpm、4°C离心10min，收集上清，分装于1.5ml EP管中，储存于-80°C中，可以保存1年以上。不同细胞可根据生长状况确定培养时间。

Tips：细胞上清归一化方法

对于细胞上清的检测，接种同样数量的细胞、加入同样体积培养基进行培养刺激，如果细胞生长未受到影响，收集上清时细胞数目不变，细胞上清可稀释同样的倍数来检测；如果细胞数目有变化，样品之间归一化方法建议有两种：

收集细胞上清后，对细胞进行计数，根据计数的结果来调整细胞上清的上样比值，使不同样品根据细胞数量归一化后上样检测，芯片检测所得的细胞因子信号结果可进行对比；

收集细胞上清后，可将细胞裂解，然后蛋白浓度定量，根据得到的蛋白浓度来调整细胞上清的上样比值，使不同样品根据细胞裂解后蛋白浓度来归一化后上样检测，芯片检测所得的细胞因子信号结果可进行对比。

5、细胞裂解液

细胞长满培养皿（d=10cm）时，（数量约为106-108）将上清吸掉，用PBS（4°C）清洗2次细胞，加入200-500μl细胞裂解液，（或者参照您购买的裂解液说明书），快速将细胞从培养板刮下，收集细胞裂解液，加入微量离心管中，使用涡旋振荡器振荡混合30min。14000rpm、4°C离心混合液15-20min，将清澈上清转入干净的离心管中（确保只吸取上层清澈细胞裂解液上清，如果上清出现絮状或者浑浊，将细胞裂解液上清转入干净的离心管中，于14000rpm、4°C再次离心15-20min后取上清）。建议裂解蛋白浓度至少2mg/ml，上样时稀释倍数约5-10倍。

6、组织裂解液

将组织切成小块，转移至2ml离心管，建议10mg组织加入500μl裂解液（或者参照您购买的裂解液说明书），冰上静置15-25min，使用均质机将组织打碎，14000rpm、4°C离心混合液15-20min，将清澈上清转入干净的离心管中（确保只吸取顶层清澈细胞上清，如果上清出现絮状或者浑浊，将细胞上清转入干净的离心管中，14000rpm、4°C再次离心15-20min后取上清）。