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对于首次使用stemcell磁珠分选试剂盒的老师,小编为大家整理了一些操作注意事项,助攻您的实验结果,快来看看吧!
1 、全程室温操作,使用过程中试剂盒也置于室温,使用完毕后置于4度冰箱保存即可。切忌冻存,因为抗体的反复冻融会极大影响其活性。
2 、无需裂解红细胞,直接使用试剂盒(小鼠的负选试剂盒)。
因为无需裂解红细胞,所以需要您对有核细胞进行计数,以方便您准确加入抗体及磁珠。
推荐的有核细胞计数液3% Acetic Acid with Methylene Blue,即含亚甲基蓝的3%醋酸 #07060 用于含红细胞的样本计数。这边会通知我们的销售同事为您送过去1ml试用。
有核细胞计数液使用非常简单。就做细胞稀释使用。
eg 、如果是稀释100倍,可以10ul细胞原液+90ul有核细胞计数液。然后再取10ul第一次稀释+90ul有核细胞稀释液。
稀释倍数根据您的实验需求而定,然后可以直接细胞计数。
3 、需要的Buffer:
RoboSep Buffer #20104 250 mL或EasySep Buffer #20144 1 L 分选缓冲液 稀释样本或分选时可使用;也可以自配。
配方是:PBS (Catalog #37350) containing 2% FBS and 1 mM EDTA.
4 、配套的磁极:
紫色EASYSEP磁极(产品号 #18000)一般的样本规格,紫色磁极即可。
5、 推荐使用的5ml流式管,聚苯乙烯材质圆底管(e.g. Corning Catalog #352058),此推荐的试剂管是经过研究人员测试过的,其他试管未经测试。