Peprotech细胞因子溶解注意事项

      PeproTech细胞因子中不含载体蛋白（Carrier Protein）或其他添加剂（如BSA、HSA或蔗糖等），并且通常以最少量的盐来进行冻干处理，因此微量的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内，形成很薄或不可见的蛋白层。所以我们建议在收到产品后，务必在开盖前先离心，使粘在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底（此时能否见到白色沉淀均属正常现象），达到所有蛋白均被溶解的目的。

溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。所以请您务必按照说明书的溶解方法来操作。

    Peprotech细胞因子溶解方法步骤：

1、 开盖前一定要离心：10000rpm，30s

2、 严格使用说明书中推荐的溶剂来溶解。

注：请不要使用说明书以外的溶液溶解粉末状细胞因子，比如培养基，或者含有0.1%BSA的溶液；

l 要求用去离子水溶解的产品，务必不可用盐溶液，避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出；

l 要求用盐溶液溶解的产品，请依照说明书上的浓度，同样也是为了避免过高的盐浓度。

3、初始务必溶解至说明书要求的浓度范围，一般是0.1-1.0mg/ml；这个浓度范围可以使细胞因子达到活性最好的状态，可以保持良好的稳定性，请务必参考；譬如，10ug产品，用10-100ul说明书推荐溶剂溶解。

4、溶解时切不可涡旋振荡；避免因化学键的断裂造成蛋白失活，可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间，待细胞因子完全溶解后使用，一般室温静置15-30min，即可完全溶解；对于一些不易溶解的细胞因子，请参考说明书的溶解方法。

5、如果长期保存（-20~-80°），需要用含有0.1%BSA、10%FBS或者5% HSA的缓冲液来稀释保存；

l 缓冲液可以是培养基（RPMI1640/ DMEM）或者PBS（水不可以，因为水没有缓冲能力）；稀释保存的细胞因子浓度务必在1ug/ml以上，于-20-80℃分装冻存；分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量，以实验每次试验用完一支工作液，避免反复冻融引起蛋白活性的降低。

l 如果实验中细胞因子（无动物成分细胞因子---Animal Free）中不能含有BSA，FBS或HSA等动物或人的蛋白，可以使用5%海藻糖作为载体，稀释分装，保存浓度要求在1ug/ml以上。

   另外，Peprotech 新推出一个实用工具：http://www.peprotech-asia.com/convertor/ch/citric.html，利用此网站即可较快地计算出不同pH及不同浓度的Tris缓冲液(用于重悬重组人FGF-basic)、磷酸盐缓冲液(用于重组人KGF、FGF-10、FGF-acidic等)、柠檬酸(盐)缓冲液(用于重悬重组人TGF-beta1等)、醋酸溶液(用于重悬重组人IL-2等)的配制方法。