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分选柱(Column)是MACS技术的核心,其特点如下:
填充有不同规格的铁珠,可分选或者去除10^7-10^10细胞;
表面亲水包被,不损伤细胞,同时保证流速;
可以将磁场放大1000-10000倍,因此只需极少的细胞表位被识别即可被磁场捕获,从而为后续实验预留足够抗原表位,如磁珠分选后的细胞无需切除磁珠即可直接染流式抗体,而不受影响。
美天旎的分选柱分几类,如MS、LS、LD级autoMACS column 等,那么,这些有什么区别呢,您在实验中又该如何去选择适合您的分选柱呢?
我们知道,美天旎的MACS分选策略有阳性分选、去除分选,那我们就按两种分选策略来分析如何选择恰当的分选柱:
一、阳性分选
1、要分选的细胞数量:
如下图所示:MS柱容纳的最大细胞上样量是2×10^8细胞(既包含阳性细胞又包含阴性细胞),而其能捕获的阳性细胞最多是10^7。
2、目的细胞是常见细胞还是稀有细胞
为了在分选稀有细胞(表达频率〈5%)时得到较更高的纯度,您可以使用两个分选柱:用一根分选柱进行一次分选后,阳性成份再过一次新的分选柱。
3、大体积的细胞
另外,如果您要分选的目的细胞是体积较大的特殊细胞,如原生动物细胞、人皮肤郎罕式细胞、鼻咽癌细胞、心肌细胞等,那推荐您使用Large cell column。因为大细胞柱的铁珠间隙足够大,容许这些特殊的大体积细胞顺利通过。
二、去除分选
去除分选中需要考虑以下几个因素:
1 您使用MACS isolation kits 或MACS microbeads吗?
2 抗原表达强还是弱呢?
3 您需要更高的纯度还是回收率呢?
4 您需要分选多少细胞?
根据这几个因素,您可以按下图的标识来选择合适的去除分选柱。
产品订购信息如下:
厂商简称 | 目录号 | 产品名称 |
Miltenyi | 130-042-201 | MS Separation columns |
Miltenyi | 130-042-401 | LS Separation columns |
Miltenyi | 130-042-901 | LD Columns, 25 p |
Miltenyi | 130-042-701 | µMACS Columns |
Miltenyi | 130-042-801 | M columns |
Miltenyi | 130-042-202 | Large Cell Separation columns |
Miltenyi | 130-041-201 | D Separation columns |
Miltenyi | 130-041-202 | XS Separation columns |
Miltenyi | 130-041-301 | MS Separation Columns plus tubes |
Miltenyi | 130-041-302 | AS separation columns |
Miltenyi | 130-041-304 | BS separation columns |
Miltenyi | 130-041-305 | CS separation columns |
Miltenyi | 130-041-306 | LS Separation columns plus tubes |